L’émergence des bactéries multi-résistantes nécessite la recherche de biomolécules à activité antibactérienne. L’objectif du travail était d’isoler et de caractériser des souches d’actinomycètes productrices de substances antimicrobiennes. Des échantillons de sol ont été prélevés sur 2 sites : le parc urbain Bangré Weogo (BW) et la serre de l’université Joseph KI-ZERBO. Les échantillons ont été analysés au LaBIA, université Joseph KI-ZERBO (Burkina Faso). L’isolement des souches d’actinomycètes a été fait sur le milieu Caséine-Amidon- Agar supplémenté de nystatine et de chloramphénicol après enrichissement au CaCO3. L’activité antibactérienne a été réalisée par la méthode de diffusion de puits d'agar. L’observation des souches et les tests biochimiques ont été effectués en vue d’identifier les souches. Au total, 20 souches ont été isolées, 07 avaient une activité antibactérienne. Les souches BW12 et BW13 ont présenté une activité antibactérienne aussi bien sur les bactéries pathogènes à coloration Gram négatif que sur celles à coloration Gram positif. Le plus grand diamètre d’inhibition a été obtenu avec la souche BW12 contre Bacillus licheniformis et le plus petit a été obtenu avec les souches BW1, BW9, BW10 contre Bacillus spizini et BW14 contre Enterococcus feacalis. Ce travail nous a permis d’isoler de présumés Streptomyces productrices de substances contre les bactéries.